紫外分光光度法是根據物質(zhì)的吸收光譜,來(lái)研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見(jiàn)光區任意選擇不同波長(cháng)的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(cháng)的光能量,相應地發(fā)生了分子振動(dòng)能級躍遷和電子能級躍遷的結果。
實(shí)驗室選擇時(shí)需要根據自己實(shí)驗室的需要和目的用途來(lái)考慮,光學(xué)構造和光源、探測方法、樣品類(lèi)型和數據處理等都是要考慮的因素。
光源和檢測方法
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素。實(shí)驗室研究人員希望省錢(qián)購入專(zhuān)門(mén)儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長(cháng)情況。
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見(jiàn)光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素燈一般只覆蓋可見(jiàn)光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見(jiàn)光區域。
分光光度計的帶寬很大程度上依賴(lài)于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧?shí)驗精確要求的譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿(mǎn)足多種實(shí)驗需要。
光學(xué)構造
一般來(lái)說(shuō),紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類(lèi)。顧名思義,單光束型主要是依賴(lài)單束光進(jìn)行測量。一束給定波長(cháng)的光通過(guò)對照物,然后再通過(guò)實(shí)際樣品溶液,就能得到吸光結果。
雙光束型則是通過(guò)一個(gè)斬光輪將一束光分成兩束,分別測量對照樣品和實(shí)際樣品??梢宰钚』馄坪蜏p少測量時(shí)間。一些雙光型光度計不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來(lái)代替,將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度,所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。
樣品類(lèi)型
在大部分的樣品類(lèi)型中,分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿(mǎn)足高通量的需要和大規模的實(shí)驗室需求。但盡管對于小實(shí)驗室來(lái)說(shuō),制造商仍然提供了多種容器轉換器來(lái)滿(mǎn)足通量的要求和減少實(shí)驗時(shí)間。
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來(lái)滿(mǎn)足各種改變需要。體現了柔韌性。
數據管理
大部分單機型的分光光度計包含了驅動(dòng)儀器運行和管理數據的軟件。高性能的儀器,通常與PC機一起聯(lián)用,需要從制造商提供額外的軟件。同時(shí)用戶(hù)也可以選擇升級軟件以滿(mǎn)足他們的需要。
另外一個(gè)值得考慮的因素是數據的最終使用。各獨立實(shí)驗室都有各自感興趣的實(shí)驗結果。例如一些藥物機構需要考慮美國FDA的要求和歐聯(lián)盟的藥物評價(jià)機構的要求選擇不同的數據處理方式。